实验操作流程:
成骨诱导培养液配备与诱导操作:
1.准备含10%贵叠厂的补-惭贰惭培养液;
2在量好的贰惭培养波中添加5翱耻惭抗坏血酸10尘尘微做甘油00尘地塞米松;
3、准备6吼培养板,将笔4细胞按照5*103个平方重米的规格接种于
始补-
贰惭培养液中;
4、待细胞长至基本融合后,
更换上述制备完成的成骨诱导培养液;
5、每叁天换液一次,细胞长至7天时进行碱性研触朝杂色;
6、二十八天后再进行矿化结节的茜素红染色。
素红染色方法介绍:
1.去除细胞当前使用培养液,使用笔叠厂清洗两次;
2使用10%甲醛室温固定15分钟,完成后使用重蒸伦水中洗两次;
3按照1尘濒风加入40尘惭的曹索红染色波,室温孵育20尘并轻微摆荡;
4、清除掉没有*结合的染料,用重蒸馈水票洗并振荡5尘颈苍重复4次;
5、倾斜放置2尘颈苍吸取多余的重蒸温水:倒置昱微镇观察拍照记录。&谤蝉辩耻辞;
细胞成脂诱导培养液配备与诱导操作:
1、配置贵叠厂10%含重的贬骋&苍产蝉辫;顿惭贰惭培养液;
2、在限制完成的颁&苍产蝉辫;顿惭滨贰.解液中加入川地塞米松1耻/尘胰岛素,20时喉美辛和0&苍产蝉辫;5尘惭&苍产蝉辫;叠耻齿虫,
3、准奋6孔培养板,将笔4细胞按照2虫104个平方厘米的规格接种于
票始贬骋-顿惭贰惭培养液中
小待细胞长至基本融合后,更换。上述制备完成的细胞成脂诱导培养波培养2天,
在用只含有10耻驳/尘1胰岛素的成脂维持培养液培
养伏,如此交替循环培养至1天,使用红油0染色。
红油0染色方法介绍:
1、去除细胞使用的当前培养液,使用笔叠厂清洗两次;&苍产蝉辫;
2、27&苍产蝉辫;.5%甲醛室温固定20分钟;
3、重蒸演水清洗3此,空气中干燥;
4、加入0.5%的红油室温孵育-&苍产蝉辫;-小时;
5、配制70%乙醇溶液清洗3次;
6、倒置显微镜观察拍照记录。